小鼠小膠質(zhì)BV2是從小鼠腦小膠質(zhì)瘤中收集的，干冰運輸并轉(zhuǎn)移到液氮或-80度冰箱冷凍或收到后立即直接回收；存活的細胞在接收后應(yīng)繼續(xù)生長，當(dāng)傳代達到良好的細胞生長狀態(tài)時再進行冷凍。收到后，請檢查是否有漏液。先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，用酒精對瓶壁進行消毒，將T25瓶在37℃培養(yǎng)2-3H左右。
 

　　離心后，除去上清液，加入6ml新的*培養(yǎng)基，重新加入原T25培養(yǎng)瓶。如果細胞長到90%，請及時進行細胞傳代，傳代應(yīng)使用完整培養(yǎng)基。半貼壁細胞會黏附在瓶底，但黏附不緊密。輕輕吸取培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞表面，細胞表面不經(jīng)胰蛋白酶消化即脫落。推薦使用培養(yǎng)皿進行培養(yǎng)，更適合吹細胞。
 

　　吹細胞時盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡，以免影響細胞狀態(tài)。下面是小鼠小膠質(zhì)BV2使用小tips，希望對你的使用會有所幫助。
 

　　1、小鼠小膠質(zhì)BV2呈半貼壁圓形或多角形，有的呈圓形懸浮狀。它們可以在傳代過程中收集和培養(yǎng)。更換溶液時，將懸浮的細胞離心收集，然后重新連接到原瓶中。如果貼壁細胞多，活性好，可以不用懸浮細胞；

　　2、細胞對胰蛋白酶敏感。胰蛋白酶消化后，細胞形狀會更加紡錘形并變得緊密，不建議通過胰蛋白酶消化；

　　3、細胞生長快，培養(yǎng)基消耗快。在培養(yǎng)過程中密切注意細胞狀態(tài)。當(dāng)密度高，培養(yǎng)液趨于變黃時，及時更換溶液，避免細胞狀態(tài)變差；

　　4、小鼠小膠質(zhì)BV2細胞冷凍后，取出上清，用PBS洗滌，然后加入1ml胰蛋白酶。待細胞變圓脫落后，加入1ml培養(yǎng)基終止消化，用血細胞計數(shù)板計數(shù)；

　　5、4min1000rpm離心去除上清液。加入1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)加入血清和DMSO，輕輕混勻。DMSO終濃度為10%，細胞密度為1-2xe6/ml。每個冷凍保存管用1ml細胞懸液冷凍，注意凍存管的鑒別；

　　6、將凍存管放入程序冷卻箱內(nèi)，放入-80℃冰箱，至少2小時后轉(zhuǎn)入液氮沖洗保存。記錄低溫恒溫器的位置以備下次檢索。